Joseph Wiseman (Dr. Julius No)

El primero de una larga lista de genios perversos que se enfrentan a James Bond. El Dr. Julius No se mantiene como uno de los más legendarios villanos del cine. Soberbiamente representado por Joseph Wiseman, se trata de un personaje único cuya presencia domina tanto la película que es casi una revelación el darse cuenta que no aparece hasta la última tercera parte del film.

Estableciendo el ejemplo a seguir para los enemigos de Bond, el Dr. No sería un asesino despiadado con un complejo de Napoleón aunque con dotes de anfitrión excepcionales al explicar tranquilamente durante la cena, ante un Bond vencido y cautivo, su turbio pasado.

Hijo de de un misionero Alemán y de una mujer China, el Dr. No se convirtió en el tesorero de un importante sindicato del crimen oriental, los Tongs. Se escapó con 10 millones de dólares de sus fondos, convirtiéndose en miembro de una organización terrorista secreta, SPECTRA.

Desde su fortaleza atómica camuflada como una mina de bauxita en la isla privada de Crab Key en la costa Jamaicana, establece su mini reinado desde el que sabotea el programa espacial americano.Sin embargo, su riqueza y éxito tuvo un precio: la pérdida de sus manos en un experimento. Así pues, las sustituyó por manos metálicas capaces de desmenuzar una piedra.

Al final, 007 se las arregla para detener el inminente plan de sabotear otro cohete americano. En la tensa lucha a muerte, el Dr. No cae en una piscina llena de agua radioactiva hirviendo, una muerte espantosa si la comparamos con la novela de Fleming en la que muere enterrado bajo una montaña de pájaros guano.

Anthony Dawson (Profesor Dent)

En su papel de geólogo Jamaicano, el Profesor Dent es una figura respetada. Amigo de Strangways, el agente de inteligencia inglés que investiga al Dr. No, y frecuente jugador de bridge junto a él en el Queen's Club.

En realidad Dent es un secuaz del Dr. No y juega un papel clave en el asesinato de Strangways. Cuando 007 sospecha de Dent, el profesor intenta asesinarle poniéndole una tarántula en la cama. Al reaparecer Bond intacto, Dent intenta hacer el trabajo el mismo emboscándole en la casa de la atractiva Miss Taro. Sin embargo, encuentra a Bond esperándole con Walther en mano.

La secuencia en la que Bond dispara tranquilamente al Profesor Dent se hizo más corta después que los censores se quejaran de que la muerte del mismo era un asesinato a sangre fría.

Los tres ratones ciegos

Se trata de un trio de supuestos mendigos ciegos de Kingston, Jamaica, que en realidad son asesinos a sueldo trabajando para el Dr. No. Son ellos quienes asesinan a Strangways y a su secretaria Sra. Trueblood dejando lista la misión que traerá a 007 a la isla. Estos "hombres ciegos" aparecen por primera vez en la película durante los títulos de inicio acompañados de la canción "Three Blind Mice". Su aparición final es en una secuencia de persecución en la que intentan sacar de la carretera al coche de Bond. 007 consigue girar la tortilla y acabar con sus asesinos, provocando la ironía "creo que iban a un funeral"

Zena Marshall (Miss Taro)

Esta exótica mujer fatal trabaja de día como secretaria de Pleydell-Smith, el secretario de asuntos exteriores inglés en Jamaica. Sin embargo, de noche se convierte en espía del Dr. No, sacando información secreta. Miss Taro invita James Bond a su casa en Blue Mountains para una velada exótica. En realidad, es un plan para acabar con él. Tras disfrutar de una sesión sensual en la cama de Miss Taro, Bond demuestra el significado real del coitus interruptus arrestándola de repente. Un poco más tarde, sus sospechas se hacen realidad, y aparece el Profesor Dent en un inteto fallido de asesinarle.

Margaret LeWars (La fotógrafo)

Esta guapa a la par que misteriosa fotógrafo Jamaicana freelance, intenta fotografiar sin éxito a 007 repetidas veces, antes de que Bond y Quarrel la atrapen e interroguen.

Dándose cuenta que la fotógrafo está del lado del Dr. No, Quarrel pregunta tranquilamente a 007 si le debe romper un brazo. Bond, siempre caballeroso, decide destruir el carrete antes de liberarla.

Reggie Carter (Sr. Jones)

Agente del Dr. No, el Sr. Jones se presenta como chófer enviado a recoger a Bond en el aeropuerto de Kingston. El agente 007 se huele lo peor y decide enfrentarse a Jones en una carretera apartada utilizando el judo para deshacerse de él. Jones escoge morder una tableta de cianuro antes que arriesgarse a ser interrogado. El especialista Bob Simmons dobló a Carter en la lucha contra 007.